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伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小与血浆白蛋白相近，而且在血液中与血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。伊文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量，也可作动脉插管的定位。正常情况下血浆白蛋白无法透过血脑屏障，所以染色后如果神经系统血脑屏障完整，与血浆白蛋白结合的依文思蓝无法使其着色，相反如果神经系统血脑屏障被破坏，依文思蓝就可以进入神经系统并使其着色，在荧光波长470nm、540nm处有强峰，680nm处有弱峰，可以使用化学透析法和比色法进行检测。

伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活；活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色，伊文思蓝染色后通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中0.5%为最常用的浓度；活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。

• 伊文思蓝染色液(2%)对人体有轻微毒性，请小心防护。
  
• 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。
  
• 血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain(0.5%)注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。
  
• 最好采用低温冷冻离心机进行离心。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 该试剂仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。

• 血脑屏障通透性
  
  • 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，经尾静脉或股静脉按照2～3mL/kg的比例Evans Blue Stain(0.5%)，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色，后处死小鼠，取目的脑组织。
    
  • 脑组织置于1.5mL离心管中，加入1mL PBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，1000g离心。
    
  • 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育；该步骤亦可采用如下操作:取上清，按上清∶丙酮=3∶7比例加入丙酮，室温孵育。
    
  • 1000g离心或2000g离心。
    
  • 取上述溶液1～2mL，用分光光度计测620nm处吸光值(OD值)，同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线，根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。
• 活细胞染色
  
  • 取100μL重悬细胞到常规1.5mL或0.5mL离心管内，入100μL Evans Blue Stain(0.5%)轻轻混匀，染色(染色时间可适当延长)。
    
  • 吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。计算公式如下：
    
    细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%
• 种子染色
  
  • 用刀片做横切和沿种胚中央准确纵切，入染色液染色。
    
  • 蒸馏水中浸泡，视脱色程度而定。